Anticuerpo policlonal que reconoce antígenos específicos de Dictyocaulus viviparus

Abstract

Con vistas a desarrollar un método de diagnóstico indirecto para la detección de antígenos en dictyocaulosis bovina se procedió a la obtención de un anticuerpo policlonal. En una zona afectada de las Tunas se detectaron animales positivos lográndose obtener buen rendimiento de adultos de Dviviparus. Un carnero de raza Pelibuey fue inmunizado con 500 ug de un antígeno somático extraído de dichos parásitos adultos y purificado por ultrafiltración AMICON con el empleo de una membrana YM-30, mediante inyecciones subcutáneas de estos emulsificados en adyuvante completo de Freund en la primera dosis y con adyuvante incompleto en las tres restantes a intervalos de 7 días La respuesta de IgG fue observada a los 15 días de la primera inoculación utilizando un ELISA indirecto previamente normalizado, el cual detecta los niveles de esta inmunoglobulina en el carnero y al finalizar el protocolo con estos animales los títulos alcanzados fueron mayores de 1/ 51 200. El carnero fue sangrado y el suero colectado. Por cromatografía de afinidad empleando un equipo FPLC se desarrolló la purificación de la inmunoglobulina G empleando como buffer de corrida trietanolamina 0,5 M una vez que los sueros fueron precipitados con Sulfato de Amonio al. 45 %. Una fracción anti-IgG YM-30 fue conjugada por el método del Peryodato utilizando peroxidasa tipo VI, mostrando el conjugado obtenido un valor de Rz de 0.41 y un titulo de 1/ 12000. A una concentración de 10 ug de IgG anti-Ag YM-30 como recubrimiento; son detectados 15 ng de Ag YM-30 con el empleo del ELISA sándwich. Estos anticuerpos constituyen entonces un punto de partida para la captura de antígenos metabólicos de D. viviparus a través de esta variante de método inmunoenzimático